какая группа крови у свиней
Существуют ли группы крови у животных
Знаете ли вы свою группу крови? А группу крови своего кота?
Группа крови — это антигенные характеристики эритроцитов по типу углеводов и белков в их мембранах. Поэтому если эти группы не совпадают, организм будет враждебно реагировать на такую кровь. У человека существует несколько систем антигенов в разных группах крови (всего систем 36), но обычно ее определяют в системе AB0 (O I, A II, B III и AB IV) и ее принадлежность к резус-фактору (-/+). Что касается животных, то у них существуют свои системы, которые не пересекаются с человеческой.
Например, у собак есть семь популярных групп, которые также имеют свой резус-фактор (всего у собак было выявлено около 13 групп крови). Все они являются разновидностью DEA — антигена собаки, который доминирует в их эритроцитах. В системе DEA есть несколько групп: 1.1, 1.2, 3, 4, 5, 6 и 7. Часто псы одной породы имеют одну и ту же группу, например, 60% борзых имеют отрицательную DEA 1.1. Интересно, что 98% собак совместимы с DEA 4 и только 42% с DEA 1.1. Однако на сегодняшний день, ученые продолжают находить новые группы крови у собак. Недавно, специалисты установили, что у далматинцев есть своя группа — Dal.
Способ определения групп крови у свиней
Владельцы патента RU 2300880:
Изобретение относится к иммуногенетике. Способ включает взятие образцов крови у животных, получение суспензии эритроцитов путем смешивания образцов крови с физиологическим раствором и последующего центрифугирования, постановку реакции с использованием 96-луночных пластиковых плоскодонных планшетов, в которые вносят суспензии эритроцитов и иммуноспецифические сыворотки, встряхивание планшетов, помещение их в термостат на инкубацию и читку реакции. При этом встряхивание планшетов осуществляют с помощью планшетного фотометра, а перед помещением планшетов в термостат у образцов также с помощью планшетного фотометра определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм. Затем осуществляют инкубацию образцов в термостате при температуре 37°С в течение 40 минут. После чего образцы дополнительно встряхивают и инкубируют еще в течение 1,5-2,0 часов и снова определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм. Читку реакции осуществляют путем вычитания показателей степени поглощения видимого света образцами после инкубации из показателей степени поглощения видимого света образцами до инкубации. После чего полученные значения переводят в баллы серологического теста. Способ позволяет повысить объективность оценки при сокращении трудозатрат на тестирование животных. 6 табл.
Изобретение относится к иммуногенетике, в частности к способам тестирования свиней по эритроцитарным антигенам или группам крови. Контроль происхождения (отцовства) племенных животных в РФ является обязательным условием для ведения селекционной работы (Ст.19 Закона РФ «О племенном животноводстве»). Государственной программой «Генетическая экспертиза племенной продукции (материала) в Российской Федерации» (приказ Минсельхоза РФ №291 от 19 мая 1998 года) в качестве обязательного мероприятия предусмотрено проведение генетического тестирования и использование полученных данных в племенной работе. Начало использования генетических маркеров при разведении сельскохозяйственных животных дала наука иммуногенетика, а именно исследование групп крови (эритроцитарных антигенов). Анализ систем групп крови и сегодня остается основным методом генетического контроля происхождения животных. Определение групп крови у свиней проводят, используя серологические реакции агглютинации и гемолиза с применением иммуноспецифических сывороток.
Задача изобретения заключалась в разработке более эффективного способа определения групп крови свиней.
Пример. Контрольное использование предложенного способа тестирования свиней по эритроцитарным антигенам проводили на свиньях породы йоркшир канадской селекции ЗАО «Агроиндустрия» Орловской области.
1) Отбор крови свиней в объеме 3-5 мл осуществляли из ушной вены в пробирки с антикоагулянтом в соотношении 1:4;
2) 96-луночные пластиковые плоскодонные плашки обрабатывали дезактивирующим раствором (фосфатно-солевой буфер + 10% бычьего альбумина) с целью дезактивации адсорбирующих свойств поверхности лунки, помещали их в термостат, где выдерживали 20-40 минут при температуре 37°С, после чего дезактивирующий раствор сливали, а плашки высушивали;
3) 0,4 мл крови помещали в 2,0 мл пластиковые пробирки, смешивали с 1,6 мл физраствора, после чего центрифугировали на центрифуге ТЭТА 10 при 7000 об/мин в течение 3 мин;
4) надосадочную жидкость сливали, в пробирки добавляли новый физраствор в объеме 1,6 мл, все смешивали и вновь центрифугировали в том же режиме;
5) для получения 2,5% суспензии эритроцитов из осадка, полученного при центрифугировании, дозатором отбирали 0,02 мл и смешали с 0,78 мл физраствора;
6) раскапывание производили с помощью 8-канальных дозаторов переменного объема в 96-луночный плоскодонный планшет. Первоначально раскапывали сыворотку в объеме 0,05 мл, а затем и суспензию эритроцитов в объеме 0,05 мл. Планшеты встряхивали с помощью планшетного фотометра DYNEX MRX Revelation;
7) определяли степень поглощения образцами видимого света с длиной волны 630-650 нм до начала реакций с использованием планшетного фотометра DYNEX MRX Revelation в режиме агглютинации (матрица А), таблица 1;
Таблица 1 | ||||||||||||||
Степень поглощения света образцами до начала реакции (матрица А) | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | 1.092 | 1.139 | 1.083 | 1.091 | 1.056 | 1.116 | 1.045 | 1.061 | 1.061 | 0.973 | 1.031 | 1.079 | 1.117 | 1.108 |
2 | 0.847 | 0.914 | 0.843 | 0.867 | 0.874 | 0.890 | 0.911 | 0.847 | 0.903 | 0.980 | 0.844 | 0.944 | 0.914 | 1.017 |
3 | 0.877 | 0.889 | 0.832 | 0.813 | 0.841 | 1.076 | 0.766 | 0.810 | 0.824 | 1.160 | 0.827 | 0.852 | 0.880 | 0.877 |
4 | 1.110 | 1.063 | 1.060 | 1.023 | 1.035 | 1.092 | 0.984 | 1.046 | 1.021 | 1.058 | 1.006 | 1.053 | 1.011 | 1.125 |
5 | 1.233 | 1.192 | 1.185 | 1.133 | 1.161 | 1.168 | 1.115 | 1.108 | 1.140 | 1.288 | 1.103 | 1.173 | 1.163 | 1.191 |
6 | 0.925 | 1.025 | 1.098 | 1.024 | 1.056 | 1.101 | 1.009 | 0.997 | 1.035 | 1.078 | 0.992 | 1.065 | 1.057 | 1.172 |
7 | 1.212 | 1.658 | 1.093 | 1.157 | 1.163 | 1.193 | 1.154 | 1.129 | 1.121 | 1.121 | 1.113 | 1.169 | 1.162 | 1.194 |
8 | 1.036 | 0.942 | 1.020 | 0.992 | 1.023 | 1.077 | 0.000 | 1.008 | 1.050 | 0.991 | 0.972 | 0.986 | 1.030 | 1.260 |
8) затем планшет помещали в термостат и проводили инкубацию реакций при температуре 37°С в течение 40 мин, после чего еще раз его встряхивали и инкубировали еще в течение 1,5-2,0 часов;
9) определяли степень поглощения образцами видимого света с длиной волны 630-650 нм после проведения реакций с использованием планшетного фотометра DYNEX MRX Revelation в режиме агглютинации (матрица В), таблица 2;
Таблица 2 | ||||||||||||||
Степень поглощения света образцами после проведения реакции (матрица В) | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | 1.127 | 0.919 | 1.101 | 0.953 | 1.103 | 1.038 | 0.926 | 1.042 | 0.971 | 0.944 | 1.109 | 0.819 | 1.028 | 1.034 |
2 | 0.815 | 0.659 | 0.849 | 0.618 | 0.872 | 0.725 | 0.734 | 0.782 | 0.726 | 0.976 | 0.858 | 0.635 | 0.874 | 0.822 |
3 | 0.886 | 0.702 | 0.778 | 0.633 | 0.812 | 0.926 | 0.643 | 0.748 | 0.742 | 1.149 | 0.810 | 0.632 | 0.824 | 0.816 |
4 | 1.084 | 0.773 | 1.017 | 0.750 | 1.008 | 0.989 | 0.969 | 0.930 | 0.881 | 0.987 | 1.017 | 0.726 | 1.003 | 0.960 |
5 | 1.225 | 0.959 | 1.168 | 0.905 | 1.145 | 1.035 | 0.993 | 1.112 | 0.986 | 1.158 | 1.109 | 0.909 | 1.148 | 1.116 |
6 | 0.776 | 0.702 | 1.052 | 0.725 | 1.012 | 1.029 | 0.989 | 0.848 | 0.778 | 1.024 | 1.001 | 0.754 | 1.025 | 0.887 |
7 | 1.175 | 1.362 | 1.091 | 1.139 | 1.155 | 1.101 | 1.098 | 1.023 | 0.887 | 1.105 | 1.126 | 0.892 | 1.162 | 1.016 |
8 | 1.048 | 0.819 | 1.027 | 0.998 | 1.018 | 0.963 | 0.865 | 0.898 | 0.934 | 0.936 | 0.984 | 0.858 | 1.033 | 0.962 |
10) для идентификации результатов реакций проводили вычитание результатов степени поглощения света средой до (матрица А) и после проведения реакций (матрица В). То есть из значений таблицы 1 вычитали значения таблицы 2. При наличии реакции агглютинации наблюдали более существенные различия в изменении степени поглощения света средой, чем в случае ее отсутствия;
Таблица 3 | ||||||||||||||
Разница значении | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | -0.035 | 0.220 | -0.018 | 0.138 | -0.047 | 0.078 | 0.119 | 0.019 | 0.090 | 0.029 | -0.078 | 0.260 | 0.089 | 0.074 |
2 | 0.032 | 0.255 | -0.006 | 0.249 | 0.002 | 0.165 | 0.177 | 0.065 | 0.177 | 0.004 | -0.014 | 0.309 | 0.040 | 0.195 |
3 | -0.009 | 0.187 | 0.054 | 0.180 | 0.029 | 0.150 | 0.123 | 0.062 | 0.082 | 0.011 | 0.017 | 0.220 | 0.056 | 0.061 |
4 | 0.026 | 0.290 | 0.043 | 0.273 | 0.027 | 0.103 | 0.015 | 0.116 | 0.140 | 0.071 | -0.011 | 0.327 | 0.008 | 0.165 |
5 | 0.008 | 0.233 | 0.017 | 0.228 | 0.016 | 0.133 | 0.122 | -0.004 | 0.154 | 0.130 | -0.006 | 0.264 | 0.015 | 0.075 |
6 | 0.149 | 0.323 | 0.046 | 0.299 | 0.044 | 0.072 | 0.020 | 0.149 | 0.257 | 0.054 | -0.009 | 0.311 | 0.032 | 0.285 |
7 | 0.037 | 0.296 | 0.002 | 0.018 | 0.008 | 0.092 | 0.056 | 0.106 | 0.234 | 0.016 | -0.013 | 0.277 | 0.000 | 0.178 |
8 | -0.012 | 0.123 | -0.007 | -0.006 | 0.005 | 0.114 | -0.865 | 0.110 | 0.116 | 0.055 | -0.012 | 0.128 | -0.003 | 0.298 |
11) полученные цифровые значения переводили в баллы серологического теста:
12) в конечном итоге получаем таблицу 4 с результатами реакции агглютинации в баллах серологического теста;
Таблица 5 | ||||||||||||||
Серологический тест свиней породы йоркшир по группам крови | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | 0 | 4 | 0 | 4 | 0 | 3 | 4 | 0 | 3 | 1 | 0 | 4 | 3 | 3 |
2 | 1 | 4 | 0 | 4 | 0 | 4 | 4 | 3 | 4 | 0 | 0 | 4 | 2 | 4 |
3 | 0 | 4 | 2 | 4 | 1 | 4 | 4 | 3 | 3 | 0 | 0 | 4 | 3 | 3 |
4 | 1 | 4 | 2 | 4 | 1 | 4 | 0 | 4 | 4 | 3 | 0 | 4 | 0 | 4 |
5 | 0 | 4 | 0 | 4 | 0 | 4 | 4 | 0 | 4 | 4 | 0 | 4 | 0 | 3 |
6 | 4 | 4 | 2 | 4 | 2 | 3 | 0 | 4 | 4 | 0 | 0 | 4 | 1 | 4 |
7 | 1 | 4 | 0 | 0 | 0 | 3 | 4 | 4 | 4 | 0 | 0 | 4 | 0 | 4 |
8 | 0 | 4 | 0 | 0 | 0 | 4 | 4 | 4 | 4 | 3 | 0 | 4 | 0 | 4 |
Таблица 6 | ||||||
Группы крови свиней | ||||||
Образцы крови | Система групп крови | |||||
А | В | D | Е | F | L | |
1 | -/- | а/а | а/- | dbg/dbg | b/b | a/b |
2 | -/- | а/а | а/- | dbg/deg | b/b | b/b |
3 | -/- | a/a | а/- | dbg/deg | b/b | a/b |
4 | -/- | а/а | а/- | deg/def | b/b | b/b |
5 | -/- | а/а | а/- | dbg/dbf | b/b | b/b |
6 | -/р | а/а | а/- | deg/deg | b/b | b/b |
7 | -/- | а/а | b/b | dbg/deg | b/b | b/b |
8 | -/- | а/а | b/b | dbg/def | b/b | b/b |
Проведенное нами контрольное тестирование свиней по разработанному способу показало полное совпадение данных с результатами, полученными с использованием традиционного метода.
На чтение одной плашки (96 проб) в стандартной методике необходимо затратить не менее 10-15 минут в зависимости от лаборанта, его опыта и профессиональной подготовки, в предлагаемой нами методике на это необходимо затратить 1,5-2 минуты, что почти в 10 раз быстрее. Лабораториям иногда приходиться тестировать до 100 голов в день по 17-20 сывороток на голову, то есть до 2000 проб в день. При стандартной методике на это потребуется 1,5-2 часа, в новой методике на это уйдет примерно 15-20 минут.
Предложенный способ характеризуется меньшей трудоемкостью, более высокой производительностью и объективной идентификацией результатов реакций за счет мультисканирования на основе планшетного фотометра.
Данное изобретение может быть использовано в разведении свиней, в частности в оценке достоверности происхождения и маркерной селекции.
Способ определения групп крови у свиней, включающий взятие образцов крови у животных, получение суспензии эритроцитов путем смешивания образцов крови с физиологическим раствором и последующего центрифугирования, постановку реакции с использованием 96-луночных пластиковых плоскодонных планшетов, в которые вносят суспензии эритроцитов и иммуноспецифические сыворотки, встряхивание планшетов, помещение их в термостат на инкубацию и читку реакции, отличающийся тем, что встряхивание планшетов осуществляют с помощью планшетного фотометра, а перед помещением планшетов в термостат у образцов также с помощью планшетного фотометра определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм, после чего осуществляют инкубацию образцов в термостате при температуре 37°С в течение 40 мин, а затем образцы дополнительно встряхивают и инкубируют еще в течение 1,5-2,0 ч, после чего у образцов с помощью планшетного фотометра также определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм, при этом читку реакции осуществляют путем вычитания показателей степени поглощения видимого света образцами после инкубации из показателей степени поглощения видимого света образцами до инкубации, а полученные значения переводят в баллы серологического теста.
Группы крови у животных.
Резус-фактор
Поэтому, из-за таких осложнений, медики при переливании крови вынуждены учитывать у донора и реципиента не только обычные группы крови, но и исследовать их на наличие или отсутствие антигенов резус. Сейчас существует целая система резус-антигенов. Из них наибольшее значение имеют три антигена, обозначаемые Rho (D), Bh (С), lUi» (E), но более активным считают антиген Rho (D).
В разных районах планеты преобладают разные группы крови. Самой распространенной в мире является I группа (46%), в некоторых регионах, например в Норвегии, II группа крови (89%).
Группы крови у животных.
Подобно человеку, животные также различаются по группам крови и изоантигенным факторам эритроцитов. Однако у сельскохозяйственных животных, в противоположность человеку, «естественных» антител к эритроцитарным антигенам нет или их количество незначительно (низкий титр). В связи с этим для определения групп крови у животных приходится пользоваться так называемыми иммунными антителами, то есть сыворотками, полученными от животных того же вида, специально иммунизированных против соответствующих эритроцитарных антигенов. Для получения таких сывороток проводят цикл вливаний крови от одного животного другому животному того же вида (изоиммунизация) либо другого вида (гетероиммунизация). Получаемую сыворотку называют сывороткой-реагентом, которой выявляют групповые и типовые антигены,
С развитием иммуногенетики стало возможным более точно судить о генетических свойствах антигенных факторов крови различных животных в пределах данного вида.
Помимо зоотехнических целей, Определение несовместимости крови важно для диагностики и предупреждения заболевания новорожденных жеребят гемолитической анемией резус-типа. Аналогично диагностике резусного заболевания человека исследование крови лошадей проводят методом Кумбса с антиглобулиновой сывороткой.
В.Н. Тихонов приводит также таблицу систем групп крови кур. В этой таблице 14 систем, от А до Р, каждая из которых состоит из 2-4 субъединиц, а системы А и В соответственно из 9 и 21 факторов. Выявление столь значительного разнообразия эритроцитарных антигенов требует от исследователя кропотливого труда с применением большого набора моноспецифических сывороток-реагентов, получаемых из поливалентной (сырой) сыворотки путем адсорбирования всех ненужных антител с помощью эритроцитов, которые имеют подходящие для этого антигены. Затем эритроциты с адсорбировавшимися антителами удаляют из сыворотки путем центрифугирования.
Определенный клинический интерес представляет переливание крови у собак. Некоторые антигены их сходны с АВО системой человека, что учитывают при подборе донора к реципиенту. В качестве универсальных доноров используют А-отрицательных, не имеющих в крови агглютининов животных. Группа А крови собак соответствует аналогичной группе крови человека (Герберт, 1974).
способ определения групп крови у свиней
Изобретение относится к иммуногенетике. Способ включает взятие образцов крови у животных, получение суспензии эритроцитов путем смешивания образцов крови с физиологическим раствором и последующего центрифугирования, постановку реакции с использованием 96-луночных пластиковых плоскодонных планшетов, в которые вносят суспензии эритроцитов и иммуноспецифические сыворотки, встряхивание планшетов, помещение их в термостат на инкубацию и читку реакции. При этом встряхивание планшетов осуществляют с помощью планшетного фотометра, а перед помещением планшетов в термостат у образцов также с помощью планшетного фотометра определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм. Затем осуществляют инкубацию образцов в термостате при температуре 37°С в течение 40 минут. После чего образцы дополнительно встряхивают и инкубируют еще в течение 1,5-2,0 часов и снова определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм. Читку реакции осуществляют путем вычитания показателей степени поглощения видимого света образцами после инкубации из показателей степени поглощения видимого света образцами до инкубации. После чего полученные значения переводят в баллы серологического теста. Способ позволяет повысить объективность оценки при сокращении трудозатрат на тестирование животных. 6 табл.
Формула изобретения
Способ определения групп крови у свиней, включающий взятие образцов крови у животных, получение суспензии эритроцитов путем смешивания образцов крови с физиологическим раствором и последующего центрифугирования, постановку реакции с использованием 96-луночных пластиковых плоскодонных планшетов, в которые вносят суспензии эритроцитов и иммуноспецифические сыворотки, встряхивание планшетов, помещение их в термостат на инкубацию и читку реакции, отличающийся тем, что встряхивание планшетов осуществляют с помощью планшетного фотометра, а перед помещением планшетов в термостат у образцов также с помощью планшетного фотометра определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм, после чего осуществляют инкубацию образцов в термостате при температуре 37°С в течение 40 мин, а затем образцы дополнительно встряхивают и инкубируют еще в течение 1,5-2,0 ч, после чего у образцов с помощью планшетного фотометра также определяют степень поглощения видимого света с длиной волны 630-650 нм, при этом читку реакции осуществляют путем вычитания показателей степени поглощения видимого света образцами после инкубации из показателей степени поглощения видимого света образцами до инкубации, а полученные значения переводят в баллы серологического теста.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к иммуногенетике, в частности к способам тестирования свиней по эритроцитарным антигенам или группам крови. Контроль происхождения (отцовства) племенных животных в РФ является обязательным условием для ведения селекционной работы (Ст.19 Закона РФ «О племенном животноводстве»). Государственной программой «Генетическая экспертиза племенной продукции (материала) в Российской Федерации» (приказ Минсельхоза РФ №291 от 19 мая 1998 года) в качестве обязательного мероприятия предусмотрено проведение генетического тестирования и использование полученных данных в племенной работе. Начало использования генетических маркеров при разведении сельскохозяйственных животных дала наука иммуногенетика, а именно исследование групп крови (эритроцитарных антигенов). Анализ систем групп крови и сегодня остается основным методом генетического контроля происхождения животных. Определение групп крови у свиней проводят, используя серологические реакции агглютинации и гемолиза с применением иммуноспецифических сывороток.
Задача изобретения заключалась в разработке более эффективного способа определения групп крови свиней.
Пример. Контрольное использование предложенного способа тестирования свиней по эритроцитарным антигенам проводили на свиньях породы йоркшир канадской селекции ЗАО «Агроиндустрия» Орловской области.
1) Отбор крови свиней в объеме 3-5 мл осуществляли из ушной вены в пробирки с антикоагулянтом в соотношении 1:4;
2) 96-луночные пластиковые плоскодонные плашки обрабатывали дезактивирующим раствором (фосфатно-солевой буфер + 10% бычьего альбумина) с целью дезактивации адсорбирующих свойств поверхности лунки, помещали их в термостат, где выдерживали 20-40 минут при температуре 37°С, после чего дезактивирующий раствор сливали, а плашки высушивали;
3) 0,4 мл крови помещали в 2,0 мл пластиковые пробирки, смешивали с 1,6 мл физраствора, после чего центрифугировали на центрифуге ТЭТА 10 при 7000 об/мин в течение 3 мин;
4) надосадочную жидкость сливали, в пробирки добавляли новый физраствор в объеме 1,6 мл, все смешивали и вновь центрифугировали в том же режиме;
5) для получения 2,5% суспензии эритроцитов из осадка, полученного при центрифугировании, дозатором отбирали 0,02 мл и смешали с 0,78 мл физраствора;
6) раскапывание производили с помощью 8-канальных дозаторов переменного объема в 96-луночный плоскодонный планшет. Первоначально раскапывали сыворотку в объеме 0,05 мл, а затем и суспензию эритроцитов в объеме 0,05 мл. Планшеты встряхивали с помощью планшетного фотометра DYNEX MRX Revelation;
7) определяли степень поглощения образцами видимого света с длиной волны 630-650 нм до начала реакций с использованием планшетного фотометра DYNEX MRX Revelation в режиме агглютинации (матрица А), таблица 1;
Таблица 1 | ||||||||||||||
Степень поглощения света образцами до начала реакции (матрица А) | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | 1.092 | 1.139 | 1.083 | 1.091 | 1.056 | 1.116 | 1.045 | 1.061 | 1.061 | 0.973 | 1.031 | 1.079 | 1.117 | 1.108 |
2 | 0.847 | 0.914 | 0.843 | 0.867 | 0.874 | 0.890 | 0.911 | 0.847 | 0.903 | 0.980 | 0.844 | 0.944 | 0.914 | 1.017 |
3 | 0.877 | 0.889 | 0.832 | 0.813 | 0.841 | 1.076 | 0.766 | 0.810 | 0.824 | 1.160 | 0.827 | 0.852 | 0.880 | 0.877 |
4 | 1.110 | 1.063 | 1.060 | 1.023 | 1.035 | 1.092 | 0.984 | 1.046 | 1.021 | 1.058 | 1.006 | 1.053 | 1.011 | 1.125 |
5 | 1.233 | 1.192 | 1.185 | 1.133 | 1.161 | 1.168 | 1.115 | 1.108 | 1.140 | 1.288 | 1.103 | 1.173 | 1.163 | 1.191 |
6 | 0.925 | 1.025 | 1.098 | 1.024 | 1.056 | 1.101 | 1.009 | 0.997 | 1.035 | 1.078 | 0.992 | 1.065 | 1.057 | 1.172 |
7 | 1.212 | 1.658 | 1.093 | 1.157 | 1.163 | 1.193 | 1.154 | 1.129 | 1.121 | 1.121 | 1.113 | 1.169 | 1.162 | 1.194 |
8 | 1.036 | 0.942 | 1.020 | 0.992 | 1.023 | 1.077 | 0.000 | 1.008 | 1.050 | 0.991 | 0.972 | 0.986 | 1.030 | 1.260 |
8) затем планшет помещали в термостат и проводили инкубацию реакций при температуре 37°С в течение 40 мин, после чего еще раз его встряхивали и инкубировали еще в течение 1,5-2,0 часов;
9) определяли степень поглощения образцами видимого света с длиной волны 630-650 нм после проведения реакций с использованием планшетного фотометра DYNEX MRX Revelation в режиме агглютинации (матрица В), таблица 2;
Таблица 2 | ||||||||||||||
Степень поглощения света образцами после проведения реакции (матрица В) | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | 1.127 | 0.919 | 1.101 | 0.953 | 1.103 | 1.038 | 0.926 | 1.042 | 0.971 | 0.944 | 1.109 | 0.819 | 1.028 | 1.034 |
2 | 0.815 | 0.659 | 0.849 | 0.618 | 0.872 | 0.725 | 0.734 | 0.782 | 0.726 | 0.976 | 0.858 | 0.635 | 0.874 | 0.822 |
3 | 0.886 | 0.702 | 0.778 | 0.633 | 0.812 | 0.926 | 0.643 | 0.748 | 0.742 | 1.149 | 0.810 | 0.632 | 0.824 | 0.816 |
4 | 1.084 | 0.773 | 1.017 | 0.750 | 1.008 | 0.989 | 0.969 | 0.930 | 0.881 | 0.987 | 1.017 | 0.726 | 1.003 | 0.960 |
5 | 1.225 | 0.959 | 1.168 | 0.905 | 1.145 | 1.035 | 0.993 | 1.112 | 0.986 | 1.158 | 1.109 | 0.909 | 1.148 | 1.116 |
6 | 0.776 | 0.702 | 1.052 | 0.725 | 1.012 | 1.029 | 0.989 | 0.848 | 0.778 | 1.024 | 1.001 | 0.754 | 1.025 | 0.887 |
7 | 1.175 | 1.362 | 1.091 | 1.139 | 1.155 | 1.101 | 1.098 | 1.023 | 0.887 | 1.105 | 1.126 | 0.892 | 1.162 | 1.016 |
8 | 1.048 | 0.819 | 1.027 | 0.998 | 1.018 | 0.963 | 0.865 | 0.898 | 0.934 | 0.936 | 0.984 | 0.858 | 1.033 | 0.962 |
10) для идентификации результатов реакций проводили вычитание результатов степени поглощения света средой до (матрица А) и после проведения реакций (матрица В). То есть из значений таблицы 1 вычитали значения таблицы 2. При наличии реакции агглютинации наблюдали более существенные различия в изменении степени поглощения света средой, чем в случае ее отсутствия;
Таблица 3 | ||||||||||||||
Разница значении | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | -0.035 | 0.220 | -0.018 | 0.138 | -0.047 | 0.078 | 0.119 | 0.019 | 0.090 | 0.029 | -0.078 | 0.260 | 0.089 | 0.074 |
2 | 0.032 | 0.255 | -0.006 | 0.249 | 0.002 | 0.165 | 0.177 | 0.065 | 0.177 | 0.004 | -0.014 | 0.309 | 0.040 | 0.195 |
3 | -0.009 | 0.187 | 0.054 | 0.180 | 0.029 | 0.150 | 0.123 | 0.062 | 0.082 | 0.011 | 0.017 | 0.220 | 0.056 | 0.061 |
4 | 0.026 | 0.290 | 0.043 | 0.273 | 0.027 | 0.103 | 0.015 | 0.116 | 0.140 | 0.071 | -0.011 | 0.327 | 0.008 | 0.165 |
5 | 0.008 | 0.233 | 0.017 | 0.228 | 0.016 | 0.133 | 0.122 | -0.004 | 0.154 | 0.130 | -0.006 | 0.264 | 0.015 | 0.075 |
6 | 0.149 | 0.323 | 0.046 | 0.299 | 0.044 | 0.072 | 0.020 | 0.149 | 0.257 | 0.054 | -0.009 | 0.311 | 0.032 | 0.285 |
7 | 0.037 | 0.296 | 0.002 | 0.018 | 0.008 | 0.092 | 0.056 | 0.106 | 0.234 | 0.016 | -0.013 | 0.277 | 0.000 | 0.178 |
8 | -0.012 | 0.123 | -0.007 | -0.006 | 0.005 | 0.114 | -0.865 | 0.110 | 0.116 | 0.055 | -0.012 | 0.128 | -0.003 | 0.298 |
11) полученные цифровые значения переводили в баллы серологического теста:
12) в конечном итоге получаем таблицу 4 с результатами реакции агглютинации в баллах серологического теста;
Таблица 5 | ||||||||||||||
Серологический тест свиней породы йоркшир по группам крови | ||||||||||||||
Образцы крови | Иммуноспецифические сыворотки | |||||||||||||
Ар | Ва | Bb | Da | Еа | Ed | Eb | Ее | Eg | Ef | Fa | Fb | La | Lb | |
1 | 0 | 4 | 0 | 4 | 0 | 3 | 4 | 0 | 3 | 1 | 0 | 4 | 3 | 3 |
2 | 1 | 4 | 0 | 4 | 0 | 4 | 4 | 3 | 4 | 0 | 0 | 4 | 2 | 4 |
3 | 0 | 4 | 2 | 4 | 1 | 4 | 4 | 3 | 3 | 0 | 0 | 4 | 3 | 3 |
4 | 1 | 4 | 2 | 4 | 1 | 4 | 0 | 4 | 4 | 3 | 0 | 4 | 0 | 4 |
5 | 0 | 4 | 0 | 4 | 0 | 4 | 4 | 0 | 4 | 4 | 0 | 4 | 0 | 3 |
6 | 4 | 4 | 2 | 4 | 2 | 3 | 0 | 4 | 4 | 0 | 0 | 4 | 1 | 4 |
7 | 1 | 4 | 0 | 0 | 0 | 3 | 4 | 4 | 4 | 0 | 0 | 4 | 0 | 4 |
8 | 0 | 4 | 0 | 0 | 0 | 4 | 4 | 4 | 4 | 3 | 0 | 4 | 0 | 4 |
Таблица 6 | ||||||
Группы крови свиней | ||||||
Образцы крови | Система групп крови | |||||
А | В | D | Е | F | L | |
1 | -/- | а/а | а/- | dbg/dbg | b/b | a/b |
2 | -/- | а/а | а/- | dbg/deg | b/b | b/b |
3 | -/- | a/a | а/- | dbg/deg | b/b | a/b |
4 | -/- | а/а | а/- | deg/def | b/b | b/b |
5 | -/- | а/а | а/- | dbg/dbf | b/b | b/b |
6 | -/р | а/а | а/- | deg/deg | b/b | b/b |
7 | -/- | а/а | b/b | dbg/deg | b/b | b/b |
8 | -/- | а/а | b/b | dbg/def | b/b | b/b |
Проведенное нами контрольное тестирование свиней по разработанному способу показало полное совпадение данных с результатами, полученными с использованием традиционного метода.
На чтение одной плашки (96 проб) в стандартной методике необходимо затратить не менее 10-15 минут в зависимости от лаборанта, его опыта и профессиональной подготовки, в предлагаемой нами методике на это необходимо затратить 1,5-2 минуты, что почти в 10 раз быстрее. Лабораториям иногда приходиться тестировать до 100 голов в день по 17-20 сывороток на голову, то есть до 2000 проб в день. При стандартной методике на это потребуется 1,5-2 часа, в новой методике на это уйдет примерно 15-20 минут.
Предложенный способ характеризуется меньшей трудоемкостью, более высокой производительностью и объективной идентификацией результатов реакций за счет мультисканирования на основе планшетного фотометра.
Данное изобретение может быть использовано в разведении свиней, в частности в оценке достоверности происхождения и маркерной селекции.