какая группа крови у больного если агглютинация его эритроцитов произошла в стандартных сыворотках
Какая группа крови у больного если агглютинация его эритроцитов произошла в стандартных сыворотках
Группа крови ABO – это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. Определение группы крови имеет огромное значение при переливании крови и ее компонентов.
Группа крови, определение группы крови.
ABO Grouping, Blood Typing, Blood Group, Blood Type.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Группа крови АВO – это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. ABO (читается как “а-бэ-ноль”) является самой распространенной системой групп крови в России.
В норме организм вырабатывает антитела против тех антигенов (А или В), которых нет на эритроцитах – это агглютинины находящиеся в плазме крови. То есть у лиц со второй группой крови – А(II) – на эритроцитах присутствуют антигены A, а в плазме будут содержаться антитела к антигенам В – обозначаются как анти-B (бета-агглютинин). Так как одноименные антигены (агглютиногены) на поверхности эритроцитов и агглютинины в плазме (A и альфа, B и бета) вступают друг с другом в реакцию и приводят к “склеиванию” эритроцитов, они не могут содержаться в крови у одного человека.
Открытие групповой системы ABO позволило понять, почему переливание крови иногда происходило удачно, а иногда вызывало тяжелые осложнения. Было сформулировано понятие совместимости групп крови. Например, если человеку со второй группой крови – А(II), которая содержит антитела к антигену В, перелить третью группу крови – B (III), произойдет реакция между антигенами и антителами, которая приведет к склеиванию и разрушению эритроцитов и может иметь тяжелые последствия вплоть до летального исхода. Поэтому группы крови при переливании обязательно должны быть совместимы.
Группа крови определяется по наличию или отсутствию склеивания эритроцитов с использованием сывороток, содержащих стандартные антигены и антитела.
В центрах переливания крови на пакетах с кровью или с ее компонентами, полученными от доноров, помечается “O (I)”, “A (II)”, “B (III)” или “AB (IV)”, что позволяет быстро найти кровь нужной группы, когда она требуется.
Для чего используется исследование?
Чтобы узнать, какую кровь можно безопасно переливать пациенту. Крайне важно убедиться, что донорская кровь совместима с кровью реципиента – человека, которому ее собираются переливать. Если в донорской крови или ее компонентах есть антитела к антигенам, содержащимся на эритроцитах реципиента, то может развиться тяжелая трансфузионная реакция, вызванная разрушением эритроцитов в сосудистом русле.
Когда назначается исследование?
Переливание крови и ее компонентов чаще всего требуется в следующих ситуациях:
Что означают результаты?
Результаты показывают принадлежность крови человека к одной из четырех групп, в зависимости от наличия антигенов на эритроцитах и антител, присутствующих в крови.
Определение группы крови
В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.
В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.
| № системы | Наименование | Обозначение | Наименование генов | Хромосомная локализация |
|---|---|---|---|---|
| 001 | AB0 | AB0 | AB0 | 9q34.1—q34.2 |
| 002 | MNS | MNS | GYPA, GYPB, GYPE | 4q28—q31 |
| 003 | P | P1 | P1 | 22q11.2—qter |
| 004 | Rh | RH | RHD, RHCE | 1p36.2—p34 |
| 005 | Lutheran | LU | LU | 19q12—q13 |
| 006 | Kell | KEL | KEL | 7q33 |
| 007 | Lewis | LE | FUT3 | 19p33 |
| 008 | Duffy | FY | FY | 1q22—q23 |
| 009 | Kidd | JK | JK | 18q11—q12 |
| 010 | Diego | DI | AE1 | 17q12—q21 |
| 011 | Yt | YT | ACHE | 7q22 |
| 012 | Xg | XG | XG | Xp22.32 |
| 013 | Scianna | SC | SC | 1p36.2—p22 |
| 014 | Dombrock | DO | DO | неизвестна |
| 015 | Colton | CO | AQP1 | 7p14 |
| 016 | Landsteiner-Wiener | LW | LW | 19p13.2—cen |
| 017 | Chido/Rogers | CH/RG | C4A, C4B | 6p21.3 |
| 018 | Hh | H | FUT1 | 19q13 |
| 019 | Kx | XK | XK | Xp21.1 |
| 020 | Gerbich | GE | GYPC | 2q14—q21 |
| 021 | Cromer | CROM | DAF | 1q32 |
| 022 | Knops | KN | CR1 | 1q32 |
| 023 | Indian | IN | CD44 | 11p13 |
Система группы крови AB0
Групповая принадлежность по системе AB0
По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.
Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.
В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A1 и A2. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A1 и A2. A2 встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A2 может содержать анти-A1-антитела: в 2 % случаев в группе A2 и в 30 % в A2B. Антитела анти-A1 представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.
Методика определения групп крови A2 и A2B
Частота выявления эритроцитов A2 существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик типирования групп крови A2 и A2B.
| Число проанализированных образцов | Группа крови A (II) | Группа крови AB (IV) | ||
|---|---|---|---|---|
| Число проанализированных образцов | Группа A2 (II) в % | Число проанализированных образцов | Группа A2B (IV) в % | |
| Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин) | 1592 | 14,7 | 357 | 23,5 |
| Цоликлоны: анти-A, анти-AB | 3599 | 2,1* | 357 | 7,03* |
| Цоликлон анти-А — слабый | 3587 | 4,5* | 357 | 11,2* |
| Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки | 1592 | 17,4 | 344 | 34,2 |
Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.
Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.
В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A1 и A2. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.
Методика определения групп крови
Алгоритм выявления группы крови гемагглютинирующими сыворотоками
Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.
В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.
Техника определения группы крови цоликлонами
Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику типирования по системе AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.
Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.
Непрямой метод типирования: алгоритм действий
Методика определения основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.
При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.
Заключение о групповой принадлежности
| Результаты анализа плазмы со стандартными эритроцитами | Групповая принадлежность | ||
|---|---|---|---|
| 0(I) | A(II) | B(III) | |
| – | + | + | 0(I) |
| – | – | + | A(II) |
| – | + | – | B(III) |
| – | – | – | AB(IV) |
Система Резус
Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).
В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rhnull. Ген Xro в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rhnull не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.
Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D u (слабый) и D partial (частичный). Иммунная система D u и D partial способна вырабатывать анти-D-антитела.
Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.
Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.
Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.
Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.
Техника выявления резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер
В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.
Методика определения резус-фактора D u в пробирочном тесте
Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.
Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.
Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом
Стандартный реагент антирезус Rh0D содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента Rh0D со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.
Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.
Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».
Какая группа крови у больного если агглютинация его эритроцитов произошла в стандартных сыворотках
Для определения групп крови применяется и другой метод — по стандартным эритроцитам.
Техника получения стандартных эритроцитов. У доноров забирается кровь трех групп — 0I, АII, ВIII. Забранную кровь отмывают. Вначале кровь центрифугируют для разделения на фракции — плазму и эритроциты. Плазму удаляют, а к эритроцитам добавляют физиологический раствор поваренной соли и смешивают. Затем кровь вновь центрифугируют и удаляют жидкую часть. К оставшимся эритроцитам повторно добавляют физиологический раствор. Отмывание эритроцитов производят трижды. После окончания приготовления стандартных эритроцитов к ним добавляют консервант и хранят в холодильнике при температуре от +6° до +8 °С в течение 2 месяцев, титр их не должен быть ниже 1:32.
Методика определения групп крови по стандартным эритроцитам такая же, как для определения групп крови по стандартным сывороткам. Для определения групп крови применяются стандартные эритроциты с известными агглютиногенами А и В и плазма крови реципиента, в которой определяется наличие агглютининов альфа и бета. Выполняется эта процедура на тарелке или белой планшетке со смачиваемой поверхностью. На тарелку так же, как и при определении по стандартным сывороткам, наносятся цифровые изображения групп крови и серологическая формула стандартных эритроцитов рядом с каждой из трех клеток.
В каждую клетку раскатывается испытуемая плазма реципиента в количестве 2 капель (0,1 мл) и добавляется маленькая капля (0,01 мл) стандартных эритроцитов в соотношении 1 к 10. Все это смешивается и дается экспозиция в течение 3—5 минут.
Разберем варианты определения различных групп крови.
Первый вариант результатов определения групп крови по стандартным эритроцитам
Первая группа стандартных эритроцитов является контрольной. Далее читаем полученный ответ слева направо. Во II группе стандартных эритроцитов имеется агглютиноген А, произошла агглютинация, значит, агтлютиноген А встретил одноименный компонент агглютинин альфа. В III группе стандартных эритроцитов имеется агглютиноген В, агглютинация не произошла, значит, агглютиноген В не встретил одноименный компонент агглютинин бета. Теперь возвращаемся к контрольным стандартным эритроцитам. В I группе стандартных эритроцитов агглютинация не произошла, но там нет одного из компонентов — агглютиногенов и там реакции не может быть. Следовательно, в исследованной плазме выявлено наличие агглютинина альфа, который имеется в III группе крови.
Второй вариант результатов определения групп крови по стандартным эритроцитам
Первая группа стандартных эритроцитов контрольная. Во II группе имеется агглютиноген А, агглютинация не произошла, значит, не произошла встреча агглютиногена А с агглютинином альфа. В III группе имеется агглютиноген В, произошла агглютинация, значит, агглютиноген В встретил одноименный агглютинин бета. Возвращаемся к контрольной группе стандартных эритроцитов. В I группе — агглютинация не произошла и не могла произойти из-за отсутствия одного из компонентов — агглютиногенов. Следовательно, в испытуемой плазме находится агглютинин бета, что соответствует II группе крови.
Третий вариант результатов определения групп крови по стандартным эритроцитам
Первая группа стандартных эритроцитов является контрольной. Во II группе имеется агглютиноген А, агглютинация произошла, значит, агглютиноген А встретил одноименный компонент агглютинин альфа. В III группе имеется агглютиноген В, произошла агглютинация, значит, агглютиноген В встретил агглютинин бета. Теперь возвратимся к контрольной группе стандартных эритроцитов. В I группе нет одного из компонентов — агглютиногенов, поэтому агглютинация антиген-антитело не произошла. Следовательно, в исследуемой плазме, как выяснили, имеются оба агглютинина альфа и бета, что соответствует I группе крови.
Четвертый вариант результатов определения групп крови по стандартным эритроцитам
Первая группа стандартных эритроцитов является контрольной. Во II группе имеются агглютиногены А, но агглютинация не произошла, значит, агглютиноген А не встретил одноименный агглютинин альфа. В III группе имеется агтлютиноген В, агглютинация не произошла, значит, агтлютиноген В не встретил одноименный агглютинин бета. В контрольной I группе стандартных эритроцитов нет одного из компонентов — агглютиногенов, значит, агглютинация произойти не может. Следовательно, в исследуемой плазме нет агглютининов, что соответствует IV группе крови.
Если в контрольной группе I произошла агглютинация, что не соответствует агглютинации в основных группах II и III, то в этом случае давать заключение нельзя и следует признать ложный характер полученного результата.
Какая группа крови у больного если агглютинация его эритроцитов произошла в стандартных сыворотках
Первый вариант результатов определения групп крови. Первая группа сывороток является контрольной. Во II группе сывороток имеется агглютинин бета, агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агглютиноген В. В III группе сывороток имеется агглютинин альфа, агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агглютиноген А. В 1-й группе не произошла агглютинация, там имеются оба агглютинина — альфа и бета, что свидетельствует об отсутствии агглютиногенов. Следовательно, в исследуемой крови нет агглютиногенов, что соответствует I группе крови.
Второй вариант результатов определения групп крови
Первая группа стандартных сывороток является контрольной и должна подтверждать полученные данные. Мы начинаем чтение результатов слева направо со II группы сывороток. В этой группе сывороток имеется агглютинин бета, агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агтлютиноген В. Агглютиногена В нет. В III группе сывороток имеется агглютинин альфа, агглютинация произошла, значит, имеется агглютиноген А. В I группе сывороток произошла агглютинация, там имеются оба агглютинина альфа и бета, агглютинация могла произойти раздельно за счет встречи альфа с А или бета с В или встречи обоих агглютининов альфа и бета с А и В. Однако мы уже знаем, что агтлютиноген А имеется, а агглютиноген В отсутствует. Мы предполагаем, что агглютинация произошла за счет встречи агглютинина альфа с агглютиногеном А. Следовательно, путем несложных рассуждений мы пришли к заключению, что в испытуемой крови имеется агтлютиноген А, что соответствует II группе крови.
Третий вариант результатов определения групп крови
Повторяем высказанное положение: I группа сывороток является контрольной. Во II группе стандартных сывороток имеется агглютинин бета, там произошла агглютинация, значит агглютинин бета встретил одноименный компонент В. Агглютиноген В имеется. В третьей группе агглютинация не произошла, значит, имеющийся агглютинин альфа не встретил агглютиноген А. Агглютиноген А отсутствует.
В первой группе сывороток произошла агглютинация, можно предположить, что она произошла за счет встречи агглютинина бета с имеющимся агглютиногеном В. Значит, наличие агтлютиногена В указывает на то, что это III группа крови.
Четвертый вариант результатов определения групп крови
Вновь повторяем, I группа сыворотки является контрольной. Во II группе сывороток произошла агглютинация, в ней имеется агглютинин бета, значит, он встретил одноименный компонент агглютиноген В. В III группе сывороток также произошла агглютинация, имеющийся агглютинин альфа встретил одноименный компонент агглютиноген А.
Возвращаемся в рассуждениях к контрольной группе сыворотки. В I группе сывороток имеются агглютинины альфа и бета, там произошла агглютинация. Ранее было определено, что имеются агглютиногены А и В и, по-видимому, агглютинация произошла за счет встречи альфа с А и бета с В. В этом случае для исключения возможности ложной агглютинации мы для контроля применяем IV сыворотку крови. Если агглютинация произошла, то это говорит о ложном ее характере. Если агглютинация не произошла, то она исключает ложный характер. Следовательно, имеются агглютиногены А и В, что соответствует IV группе крови.
Отметим, что если результаты исследования в контрольных группах не соответствуют результатам в основных группах, то следует сделать заключение о наличии ложной агглютинации и запрещается давать заключение о группе крови.