какая мутация возникает при действии колхицина на клетку
Влияние колхицина на генетическую стабильность и морфогенную активность каллусов Fagopyrum tataricum (L. ) Gaertn тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Мухитов, Александр Ринатович
Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мухитов, Александр Ринатович
1. Обзор литературы.
1.1. Цитоскелет клетки. Структура и функции.
1.1.1. Структура тубулиновых компонентов цитоскелета.
1.1.1.2. Полимеризация микротрубочек.
1.1.1.4. МТ-структуры растительной клетки.
1.1.2. Функции тубулинового цитоскелета.
1.2. Клеточная стенка растений.
1.2.1. Функции клеточной стенки.
1.2.2. Взаимодействие клеточной стенки и цитоскелета.
1.3. Особенности растительной клетки при культивировании in vitro.
1.3.2. Динамика клеточных популяций в культуре.
1.3.3. Генетика растительной клетки in vitro.
2. Материалы и методы.
2.1. Объект исследования.
2.2. Условия культивирования.
2.3. Определение регенерационной способности культур.
2.4. Определение прироста биомассы каллусов.
2.5. Определение поли- и моноеахаридного состава клеточных стенок каллусов.
2.5.1. Выделение клеточной стенки.
2.5.2. Фракционирование клеточной стенки.
2.5.3. Определение содержания моносахаридов во фракциях пектинов и гемицеллюлоз.
2.6. Приготовление цитогенетических препаратов.
2.7. Определение митотической активности и хромосомных чисел.
2.8. Определение жизнеспособности клеток.
2.9. Определение проницаемости мембраны клеток.
2.10. Приготовление препаратов для гистологических и электронно-микроскопических исследований.
2.11. Выделение и электрофорез ДНК.
2.12. Выделение и электрофорез белков.
2.13. Иммуноблоттинг растворимых белков с антителами к тубулину и иммунологическое выявление гликопротеинов.
3. Результаты и обсуждение.
3.1. Влияние колхицина на морфолого-гистологические особенности каллусных культур.
3.2. Влияние колхицина на параметры культурального цикла и онтогенетическую изменчивость в морфогенных и неморфогенных каллусах.
3.2.1 Эффект колхицина на динамику жизнеспособности клеток, прирост биомассы и пролиферативную активность каллусов.
3.2.2. Действие колхицина на цитогенетические характеристики каллусов.
3.3. Постэффекты колхицина на морфологию, генетику и морфогенную способность каллусов.
3.3.1. Постэффект длительного воздействия колхицина на морфологические и цитогенетические признаки каллусов.
3.3.2. Постэффект колхицина на морфогенную способность каллусов.
3.4. Получение колхицин-резистентной линии каллуса
F. tataricum и её характеристика.
3.4.1. Получение линии каллуса, устойчивого к ингибитору.
3.4.2. Свойства колхицин-резистентного каллуса линии CR4.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биохимия», 03.00.04 шифр ВАК
Редокс-метаболизм каллусов гречихи, отличающихся по морфогенной способности 2011 год, кандидат биологических наук Сибгатуллина, Гузель Валерьевна
Внеклеточные полимеры культуры клеток гречихи татарской Fagopyrum tataricum (L.) Caertn. и их участие в процессах роста и морфогенеза 2006 год, кандидат биологических наук Акулов, Антон Николаевич
Влияние салициловой кислоты на некоторые морфофизиологические показатели и белковый состав каллусов гречихи татарской 2003 год, кандидат биологических наук Галеева, Екатерина Инсафовна
Особенности каллусогенеза и морфогенеза в культуре тканей различных видов гречихи 1999 год, кандидат биологических наук Костюкова, Юлия Анатольевна
Культура клеток и тканей пшеницы in vitro и соматический эмбриогенез 2001 год, доктор биологических наук Шаяхметов, Изгам Фазлиахметович
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние колхицина на генетическую стабильность и морфогенную активность каллусов Fagopyrum tataricum (L. ) Gaertn»
Исследования, проведённые учёными за последние три десятилетия, ярко иллюстрируют, что клеточная стенка и цитоскелет растений вовлечены в регуляцию морфогенеза и биохимическая перестройка этих структур может приводить к высвобождению сигнальных молекул, функционирующих как вторичные мессенджеры (Fry, 1988; Streuli, 1999). Поддержание определенного размера является необходимым условием для сохранения и реализации клеткой морфогенетического потенциала, и это условие осуществляется вследствие координированного взаимодействия элементов цитоскелета и клеточной стенки (Lloyd, 1980).
Колхицин часто используется для индукции полиплоидии, поскольку он разрушает веретено деления, тем самым, препятствуя расхождению хромосом. Кроме того, установлено, что колхицин является мутагеном (Hague, Jones, 1987) и может вызывать изменение транскрипции определенных генов (Rosette, Karin, 1995). Тем не менее, эффект длительного воздействия колхицина на генетическую стабильность малоизучен, хотя проведение таких исследований немаловажно в связи с тем, что колхицин широко используется при получении полиплоидов, межвидовых гибридов и чистых линий многих сельскохозяйственных растений, а также применяется в качестве цитостатического агента в терапии опухолей. Таким образом, важность изучения действия колхицина на клетку определяется не только актуальностью исследования участия клеточной стенки и цитоскелета в процессе морфогенеза, но и широким практическим применением колхицина в биологии и медицине.
Ранее нами было показано (Румянцева и др., 1998), что морфогенные каллусы Fagopyrum tataricum сохраняют характерную морфологию, способность к регенерации и хромосомные числа стабильными в течение длительного культивирования (до 10 лет). Неморфогенные рыхлые клоны возникают в таких каллусах с частотой один случай на 30-40 пассажей и могут рассматриваться как спонтанные точковые мутации. Использование такого объекта может быть крайне удобным для изучения индуцированной нестабильности in vitro.
Целью нашей работы было изучить действие колхицина на генетическую стабильность и морфогенную способность каллусов гречихи татарской. Основными задачами этой работы были следующие:
1. Изучить влияние длительного воздействия колхицина на параметры культурального цикла (прирост биомассы, пролиферативная активность), а также на морфолого-гистологические особенности морфогенного и неморфогенного каллусов Fagopyrum tataricum.
2. Исследовать действие колхицина на полисахаридный состав клеточных стенок каллусов с разной морфогенной способностью.
3. Изучить влияние длительного действия колхицина на морфологическую и генетическую стабильность клеток каллусов Fagopyrum tataricum.
4. Изучить влияние колхицина на морфогенную активность каллусов гречихи татарской.
5. Проанализировать белковый состав каллусов с разным морфогенным потенциалом.
Научная новизна работы. Впервые проведено комплексное исследование действия колхицина на целый ряд параметров длительно культивируемых каллусных линий. Изучены аспекты действия разных концентраций этого ингибитора полимеризации микротрубочек на морфологию, цитогенетику и морфогенную способность каллусных культур, полисахаридный состав клеточных стенок в них, а также на спектр синтезируемых белков. Впервые показано, что неморфогенные каллусы более чувствительны к ингибитору сборки микротрубочек колхицину, по сравнению с морфогенными, из-за их неспособности останавливать последующее деление клеток в ответ на нарушение митоза и возникновение аномалий кариотипа (поли- и анэуплоидизация клеток). Впервые показано, что длительное культивирование на среде с колхицином вызывает значительное изменение полисахаридного состава клеточных стенок морфогенных каллусов: уменьшение количества пектинов и увеличение количества гемицеллюлоз. Выявлено, что обработка колхицином приводит к нарушению генетической стабильности морфогенного каллуса, индуцируя в нем геномные и хромосомные аберрации. Эта генетическая и морфологическая нестабильность сохраняется в течение многих пассажей на среде без колхицина. Впервые показано, что в отличие от растворимых белков неморфогенного каллуса большинство белков морфогенных каллусов гликозилировано. Каллусы с наибольшим морфогенным потенциалом имеют наиболее богатый спектр гликозилированных белков. Показано, что неморфогенные каллусы гречихи татарской, по ряду признаков (генетическая нестабильность, высокая пролиферативная активность, неспособность клеток к дифференцировке, слабые межклеточные контакты, большая чувствительность к цитостатическому агенту колхицину) аналогичны клеткам опухолей животных. Колхицин вызывает значительное увеличение частоты возникновения клонов неморфогенного каллуса и, таким образом, оказывает на морфогенные каллусы гречихи действие сходное с канцерогенным действием этого ингибитора на клетки животных. Получена колхицин-резистентная линия каллуса, показано, что она имеет отличия по параметрам цикла культивирования и генетической стабильности от чувствительного к колхицину каллуса.
Теоретическая и прикладная значимость работы. Полученные результаты могут быть полезны для исследователей изучающих проблемы стабильности генома, сомаклональной вариабельности, динамики популяций клеток in vitro, а также роли цитоскелета в морфогенетических процессах и процессах биосинтеза клеточной стенки.
Положения, выносимые на защиту. 1. Длительное воздействие колхицина приводит к разрыхлению структуры морфогенного каллуса F. tataricum, что коррелирует с изменением полисахаридного состава клеточных стенок этого каллуса: уменьшается количество пектинов и увеличивается количество гемицеллюлоз.
2. Культивирование на среде с колхицином индуцирует морфологическую и генетическую нестабильность в морфогенном каллусе, которая сохраняется в течение многих пассажей на среде без колхицина.
3. Все клоны морфогенного каллуса, отобранные после воздействия колхицином, проявляют меньшую морфогенную активность по сравнению с контролем. Неморфогенные и частично морфогенные клоны (способные к проявлению отдельных форм морфогенеза) содержат меньше растворимых белков по сравнению с морфогенным каллусом. В отличие от растворимых белков неморфогенного каллуса большинство белков морфо генных и частично морфогенных каллусов гликозилировано. Каллусы с наибольшим морфогенным потенциалом имеют наиболее богатый спектр гликозилированных белков.
4. Неморфогенные каллусы более чувствительны к колхицину, по сравнению с морфогенным и, из-за их неспособности останавливать последующее деление клеток в ответ на нарушение митоза и возникновение аномалий кариотила (поли-и анэушюидизация клеток).
5. Неморфогенные каллусы гречихи татарской, по ряду признаков аналогичны клеткам опухолей животных. Колхицин вызывает значительное увеличение частоты возникновения клонов неморфогенного каллуса и, таким образом, оказывает на морфогенные каллусы гречихи действие сходное с канцерогенным действием этого ингибитора на клетки животных.
6. Колхицин-резистентная линия каллуса гречихи татарской отличается от чувствительных к колхицину каллусов более коротким циклом культивирования и высокой частотой хромосомных аберраций. Устойчивость каллуса к колхицину не связана с экстрахромосомной амплификацией генов.
Похожие диссертационные работы по специальности «Биохимия», 03.00.04 шифр ВАК
Реализация морфогенного потенциала гипокотилей гречихи культурной Fagopyrum Esculentum Moench. в зависимости от способа регенерации растений IN VITRO 2004 год, кандидат биологических наук Гумерова, Елена Азатовна
Морфогенез в культуре изолированных пыльников яровой мягкой пшеницы 1999 год, кандидат биологических наук Абрамов, Сергей Николаевич
Андрогенез in vitro у яровой мягкой пшеницы 2000 год, доктор биологических наук Горбунова, Валентина Юрьевна
Амплификация генов как механизм изменчивости соматических клеток млекопитающих 1983 год, доктор биологических наук Копнин, Борис Павлович
Модификация систем размножения растений на основе методов культуры in vitro: На примере сорго 1998 год, доктор биологических наук Эльконин, Лев Александрович
Заключение диссертации по теме «Биохимия», Мухитов, Александр Ринатович
1. Длительное воздействие колхицина приводит к существенным изменениям морфологии морфогенного каллуса Р^апсит: разрыхлению его структуры и исчезновению проэмбриональных клеточных комплексов. На клеточном уровне эти изменения сопровождаются вакуолизацией клеток, потерей межклеточных контактов и гибелью части клеток с признаками, характерными для программируемой клеточной смерти.
2. Впервые показано, что длительное культивирование на среде с колхицином вызывает значительное изменение полисахаридного состава клеточных стенок морфогенных каллусов: уменьшение количества пектинов и увеличение количества гемицеллюлоз.
3. Обработка колхицином приводит к нарушению генетической стабильности морфогенного каллуса, индуцируя в нем геномные и хромосомные аберрации. В колхицин-обработанных каллусах значительно увеличивается частота появления рыхлых неморфогенных клонов (4-5 клонов на пассаж, в то время как в контроле она составляет 1 клон на 30-40 пассажей). Эта генетическая и морфологическая нестабильность сохраняется в течение многих пассажей на среде без колхицина.
4. В результате экспериментальной дестабилизации генома морфогенного каллуса получена рыхлая колхицин-резистентная линия, отличающаяся от чувствительных к колхицину каллусов более коротким циклом культивирования и высокой частотой хромосомных аберраций. Устойчивость каллуса к колхицину не связана с экстрахромосомной амплификацией генов.
5. Все клоны морфогенного каллуса, отобранные после воздействия колхицином, проявляют меньшую морфогенную активность по сравнению с контролем. Установлено, что неморфогенные и частично морфогенные клоны (способные к проявлению отдельных форм морфогенеза) содержат меньше растворимых белков по сравнению с морфогенным каллусом. Впервые показано, что в отличие от растворимых белков неморфогенного каллуса большинство белков морфогенных и частично морфогенных каллусов гликозилировано. Каллусы с наибольшим морфогенным потенциалом имеют наиболее богатый спектр гликозилированных белков.
-1306. Впервые обнаружено, что неморфогенные каллусы менее устойчивы к колхицину, по сравнению с морфогенными, из-за их неспособности останавливать последующее деление клеток в ответ на нарушение митоза и возникновение аномалий кариотипа (поли- и анэуплоидизация клеток). 7. Неморфогенные каллусы гречихи татарской, по ряду признаков (генетическая нестабильность, высокая пролиферативная активность, неспособность клеток к дифференцировке, слабые межклеточные контакты, повышенная чувствительность к колхицину) аналогичны клеткам опухолей животных. Колхицин вызывает значительное увеличение частоты возникновения клонов неморфогенного каллуса и, таким образом, оказывает на морфогенные каллусы гречихи действие сходное с канцерогенным действием этого ингибитора на клетки животных.
Таким образом, проведённые нами исследования показали, что колхицин при длительном действии оказывает сильное дестабилизирующее влияние на геном, и генетическая нестабильность, индуцированная колхицином, проявляется в последующих после обработки колхицином пассажах каллуса. Вызываемая действием колхицина дестабилизация генома делает этот антитубулиновый агент эффективным инструментом для индуцирования мутаций, но может ограничить его применение для получения полиплоидов. Как было показано (Марьяхина и др., 1990), вегетативное потомство полиплоидных форм чеснока, полученных действием колхицина, отличались высокой частотой вариабельности признаков и аномалиями кариотипа.
2. Слабые межклеточные контакты: клетки НК не имеют плазмодесм (Румянцева и др., 1998) и значительно дезагрегированы. В опухолях животных адгезионные межклеточные контакты нарушены (СЬг^ойт, БешЬ, 1999);
3. Высокая степень генетической нестабильности: НК представляет собой миксоплоидную клеточную популяцию, в нём высок процент анэуплоидных клеток и более высокая частота хромосомных аберраций, по сравнению с МК. Генетическая нестабильность один из основных признаков трансформированных клеток животных. Для них характерен высокий процент хромосомных аберраций (Новиков, 1996, Терци, 1997);
4. Высокая пролиферативная активность: рост НК лимитируется только наличием в среде питательных веществ и митогенных факторов (гормонов). У клеток опухолей животных жизненный цикл клетки трансформирован, по сравнению с нормальными клетками: они практически бессмертны и непрерывно делятся (Терци, 1997).
Таким образом, неморфогенный каллус может рассматриваться как совокупность клеток, у которых нарушены механизмы контролирующие деление, способность к дифференцировке и генетическую стабильность. Именно эти механизмы нарушены у раковых клеток животных.
– 128морфогенного каллуса после прохождения аномальных митозов останавливали деление. После пересадки на среду без колхицина значительная часть каллуса погибала, деление возобновлялось в отдельных участках каллуса. Можно предположить, что клетки, выжившие на среде с колхицином, после пересадки на обычную среду проходили аномальные деления. На клетках животных и грибов показано, что для активизации процесса программированной клеточной смерти после повреждения клетка должна пройти через митоз (Кгитап е! а1., 1991). По-видимому, в последующих после обработки колхицином циклах деления происходил отбор клеток менее чувствительных к индукции апоптоза. В результате, в популяции оставались клетки, наиболее устойчивые к аномалиям генома. У животных такими свойствами обладают клетки, находящиеся на разных стадиях трансформации. Если рассматривать клетки неморфогенного каллуса как аналоги опухолевых клеток животных, то их возникновение в клеточной популяции должно быть следствием событий, аналогичных таковым при трансформации клеток животных. Отбор клеток менее чувствительных к индукции апоптоза, и потому более устойчивых к повреждениям генома, по-видимому, способствовал повышению частоты трансформационных событий в клетках каллусов гречихи.
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мухитов, Александр Ринатович, 2000 год
2. Бердышев Г. Д., Голда Д. М., Зуй В. Д. и др. Общая и молекулярная генетика: Практикум, Киев.: Вища школа, 1984, 239 с.
5. Васильев А. Е. Сравнительная структурно-функциональная характеристика цитоскелета животных и высших растений // Журнал общей биологии. 1996,-Т.57,- №3,- С.293-325.
8. Глотов Н. В., Животовский J1. А., Хованов Н. В. и др. Биометрия, Л.: 1982, 264 С.
11. П.Дмитриева H. Н. Проблемы регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений // Культура клеток растений. М.: 1981. — С. 113-121.
19. Лакин Г. Ф. Биометрия, М.: Высшая школа, 1990.
21. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. Перевод с англ. М.: Мир 1984, 384 с.
24. Новиков В. С., Булавин Д. В., Цыган В. Н. Молекулярные механизмы инициации клеточной гибели / Программированная клеточная гибель. Под ред. Новикова В. С., С.-Пб.: Наука, 1996. С. 30-51.
25. Новиков В. С., Ястребов Д. В., Бахтин М. Ю. Генная регуляция апоптоза / Программированная клеточная гибель. Под ред. Новикова В. С., С.-Пб.: Наука, 1996. С. 72-79.
26. Пахомова В. М. Модели стрессовых взаимодействий и общебиологические закономерности. Неспецифичекие и специфические характеристики ответной реакции клеток растений. Казань, 1999ю 150 с.
27. Полевой В. В. Физиология растений. М.: Высшая школа, 1989.
34. Усов А. И., Яроцкий С. В. Раздельное определение гексоз и пентоз при помощи о-толуидинового реагента // Известия АН СССР, сер. Химическая,- 1974,- №4,-С.877-880.
36. Фролова Л. В., Шамина 3. Б. Динамика клеточной популяции в культуре ткани V. faba // Культура клеток растений. Киев: Наукова думка. — 1978. — С. 27-32.
38. Хесин Р. Б. Непостоянство генома М.: Наука, 1984, 472 с.
40. Щербань А. Б. Реорганизация высокоповторяющейся ДНК генома ячменя в условиях культивирования in vitro // Генетика. — 1994. — Т. 30. С. 879-885.
43. Amos L. A. Structure of microtubules. In Microtubules. K. Roberts and J. S. Hyams, eds (London: Academic Press, Ltd), P. 1-64.
59. Bergfeld R., Speth V., Schopfer P. Reorientation of microfibrils and microtubules at the outer epidermal wall of maize coleoptiles during auxin-mediated growth // Bot. Acta. 1988.-V. 101.-P. 57-67.
66. Bradford M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding // Anal. Biochem.-1976,- V.72.- P.248-254.
68. Brett C.T., Waldron E.K. Physiology and biochemistry of plant cell wall.- Eds. Black M., Cahapman E.J.- London: Unwin Hyman, 1990,- 194p.
80. Colasanti J. Cho S.- O., Wick S., Lundaresan V. Localization of the root tip and stomatal complex: association with the predicted division site in premitotic cells // Plant Cell. 1993,-V. 5.-P. 1101-1111.
83. DAmato F. The problem of genetic stability in plant tissue and cell cultures / Crop genetic resources for today and tomorrow, ed. Frankel O. H., Hawkes J. G., New York, 1975. P. 333-348.
91. Du Lieu H., Barbier M. High frequencies of genetic variant plants regenerated from cotyledons of tobacco / Variability in plants regenerated from tissue culture. Ed. Earle E. D., Demarly Y., New York, 1982. 392 pp.
102. Fry S.C. The growing plant cell wall: chemical and metabolic analysis. New York: Longmann scientific and technical.- 1988,- 333p.
126. Hush J. M., Overall R. L. Re-orientation of cortical F-actin is not necessary for ound-induced microtubule reorientation and cell polarity establishment // Protoplasma. 1992,-V. 169.-P. 97-106.
127. Ingold E., Sugiyama M., Komamine A. Secondary cell wall formation: changes in cell wall constituents during the differentiation of isolated mesophyll cells of Zinnia elegans to tracheary elements // Plant Cell Physiol.- 1988,- V.29.- P.295-303.
179. Morejohn L. C. The molecular pharmacology of plant and microtubules. In CW Lloyd, ed, The cytoskeletal basis of plant growth and form. Academic Press, London: 1991.-P. 29-43.
196. Pedroso M.C., Pais M.S. Factors controlling somatic embryogenesis cell wall changes as an in vivo marker of embryogenic competence // Plant Cell Tissue and Organ Culture.- 1995,- V.43.- №2,- P. 147-154.
217. Sawin K. E., Endow S. A. Meiosis, mitosis, and microtubule motors // Bio Essays. 1993.-V. 15.-P. 399-407.
223. Singer R. H. The cytoskeleton and mRNA localization // Curr. Opin. Cell. Biol. 1992.-V. 4.-P. 15-19.
243. Takeuchi Y., Komamine A. Changes in the composition of cell wall polysaccharides of suspension-cultured Vinca rosea cells during culture // Physiol. Plant.- 1978,-V.42.-P.21-28.
251. Van Hengel A. Chitinases and arabinogalactan proteins in somatic embryogenesis / 1998., Thesis. Wageningen, 180 p.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.
Научная электронная библиотека disserCat — современная наука РФ, статьи, диссертационные исследования, научная литература, тексты авторефератов диссертаций.
Колхицин
Среди химических веществ, используемых для удвоения числа хромосом у растений, наиболее часто применяется колхицин. Колхицин – это растительный алколоид. Механизм его действия заключается в том, что проникая в делящуюся клетку он блокирует работу веретена деления, вследствие чего после удвоения числа хромосом не происходит разделения их по дочерним клеткам. Образуется одна клетка с удвоенным числом хромосом.. Удвоение числа хромосом может предусматривать разные цели. Например, восстановление плодовитости у стерильных растений (Работягов, 1987); преодоление барьера нескрещиваемости (Рудь, 1966); улучшение каких-либо свойств растений (величина плодов, изменение химического состава и др.) (Серебровская, 1974); получение новых полиплоидных форм, пригодных для использования в селекции (Dermen, 1965; Бавтуто, 1974, 1980; Лизнев, 1977 и др.).
Для обработки применяют как водный раствор колхицина разной концентрации, так и раствор колхицина в касторовом масле, глицерине, агар-агаре.
У плодовых и ягодных растений обрабатывают семена, проростки, молодые сеянцы, точки роста побегов и т.д. В результате таких обработок в большинстве случаев получают химерные растения разных типов, а иногда и гомогенные полиплоидные формы (Dermen, 1965; Лизнев, 1977; Геращенко, 1977, 1980).
В наших опытах обработка колхицином диплоидных сортов яблони была предпринята с целью получения нередуцированной пыльцы. Поэтому обработке подвергались генератативные почки в период прохождения мейоза в пыльниках.
Опыт проводили в условиях лаборатории на срезанных ветвях, поставленных в вегетационные сосуды с водой.
В вариантах с обработкой колхицином почти на всех стадиях наблюдаются отклонения от нормы (рис. 16). Однако нарушения, которые приводят к формированию гамет, обнаружены только в вариантах 3 и 6. В варианте 3 (1% раствор колхицина в касторовом масле) количество триад, содержащих одну диплоидную и две гаплоидных микроспоры составляет 11,3% от общего числа аномальных тетрад, в варианте (0,5% раствор колхицина в касторовом масле) – 3,2%. В остальных случаях крупные микроспоры имеют аномальное строение, что свидетельствует о явном нарушении распределения хроматина во время мейотического деления. В результате их оплодотворяющая способность снижена.
Рис. 16. Количество нарушений в ходе микроспорогенеза у яблони в разных вариантах обработки колхицином.